Тинкториальные свойства бактерий: методы окраски

Тинкториальные свойства бактерий

Тинкториальные свойства бактерий – это способность бактерий к окрашиванию при использовании определенных красителей. Такие свойства могут использоваться для определения структуры и характеристик клеточной стенки и мембраны бактерий. Некоторые красители могут также помочь улучшить контрастность и видимость микроскопической структуры бактерий.

У разных видов бактерий тинкториальные свойства могут отличаться, что позволяет сделать выводы о их структуре и функциях. Например, грам-положительные бактерии обладают достаточно толстой пептидогликановой клеточной стенкой, что позволяет им сохранять кристалловилучение в процессе грам-окрашивания. Грам-отрицательные бактерии, с другой стороны, имеют более тонкую клеточную стенку и у них не сохраняется кристалловилучение.

Другой способ определения тинкториальных свойств бактерий – использование флуоресценции. При этом красителей, содержащих специальные молекулы, антитела или синтетические красители, применяют для окрашивания бактерий. Затем ведут наблюдение за светоизлучением от красителей при попадании под флуоресцентный микроскоп. Такие методы широко используются для исследований в биологии и медицине.

Примеры красителей для тинктуральной окраски:
- Кристаллфиолет ( CV )
- Сафранин ( S )
- Грам-кристалловил
- Карбофухсин ( CF )

Таким образом, тинкториальные свойства бактерий – это один из ключевых инструментов для изучения бактериальных клеток и могут использоваться в широком диапазоне исследований, начиная от таксономии и заканчивая медицинской диагностикой.

Слайд 20 Определение протеолитических свойств микробов. Методика определения аммиака. Аммиак в среде

этого в фарфоровую чашку пипеткой вносят каплю культуры, выращенной на

мясо-пептонном бульоне, и каплю реактива Несслера.

При наличии аммиака смесь окрашивается в желтый или коричневый цвет. Коричневое окрашивание указывает на большое содержание продукта гнилостного распада.

^ Методика определения сероводорода. Над культурой исследуемых микробов помещают полоску фильтровальной бумаги, смоченную раствором уксуснокислого свинца (бумага закрепляется между пробкой и стенкой пробирки). Пробирки помещают до трех суток в термостат. Почернение бумаги происходит при содержании сероводорода, который превращает уксуснокислый свинец в сернокислый.

^ Методика определения индола. Определение по методу Морелли осуществляют с помощью полоски фильтровальной бумаги, обработанной горячим насыщенным 12 %-ным водным раствором щавелевой кислоты и высушенной в термостате. Бумагу закрепляют между пробкой и стенкой пробирки. Пробирки с исследуемой культурой помещают в термостат на трое суток. Порозовение нижней части индикаторной бумаги указывает на наличие индола.

Слайд 12 Приготовление фиксированных препаратов-мазков.Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло

которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом,

чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром около 1—1,5 см, только при таком распределении материала в мазке можно увидеть изолированные бактериальные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то петлей его непосредственно наносят на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки.Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 раза (в течение 3 с) через пламя горелки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно прикрепляясь к поверхности стекла, и не смываются при дальнейшей обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей и в некоторых случаях мазки из культур микроорганизмов фиксируют погружением на 5—20 мин в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова, сулемовый спирт или другие фиксирующие жидкости.»

Тинкториальные свойства: что это такое?

Тинкториальные свойства — это способность бактерий поглощать красящие вещества. Они могут быть использованы для идентификации и классификации бактерий, так как разные виды бактерий поглощают различные красители.

Существуют различные типы красителей, используемых для окрашивания бактерий, такие как кристаллический фиолетовый, метиленовый синий и фуксин. При окрашивании бактерий красителем, некоторые бактерии могут поглощать его, а некоторые нет. Это свойство может быть использовано для определения типа бактерии и ее характеристик.

Тинкториальные свойства также являются важными для микробиологов, которые исследуют бактерии, так как они могут помочь в установлении причины заболевания и выборе правильного лечения. Например, техника Грам-окрашивания, основанная на тинкториальных свойствах, используется для разделения бактерий на группы.

Кроме того, тинкториальные свойства могут быть использованы для контроля качества в лабораторных исследованиях, например, для определения чистоты культуры бактерий или их степени размножения.

Особенности строения мицелиальных форм

Мицелий актиномицетов формируют гифы. Это тонкие ветвящиеся нити, которые удлиняются в результате апикального (верхушечного) роста. Гифы содержат большое количество нуклеоидов.

В процессе роста и ветвления гиф не происходит клеточного деления, однако могут возникать перегородки. В зависимости от этого мицелий делится на 2 вида:

Несептированный (не имеет перегородок).
Септированный — содержит перегородки, которые обычно расположены в поперечном направлении.

Мицелий может быть как стабильным, так и периодически фрагментироваться на палочки или коки, как у рода Nocardia. Ветвление тонких нитей (гиф) у разных групп актиномицетов выражено в разной степени. Актиномицеты способны образовывать как субстратный, так и воздушный мицелий.

Методика грама

Разработанный в конце 19 века способ дифференциации микроорганизмов по проницаемости клеточных стенок. Посредством обработки микробов анилиновыми красителями – метиловым или генциановым фиолетовым и промывки образца образуются две группы:

характерная синяя окраска – грамположительные микроорганизмы;
обесцвеченные промывкой – грамотрицательные.

Для получения полной картины, учитывая тинкториальные свойства исследуемых микробов, используется красный краситель, после чего все грамотрицательные микроорганизмы приобретают цвет от розового до красного.

Тест Грама классифицирует микроорганизмы и позволяет провести разделение микроорганизмов, благодаря тинкториальным свойствам, по критерию строения стенки клетки. Прикладное значение методики окраски по Граму — диагностика различных инфекционных заболеваний.

Этиология

Staphylococcus aureus — основной представитель рода Staphylococcus семейства Micrococcaceae.

Морфология. Staphylococcus aureus – шаровидная бактерия, лишенная жгутиков и способная формировать микрокапсулы, которые защищают ее от повреждения и высыхания.
Тинкториальные свойства. Стафилококки окрашиваются по Грамму в синий цвет. В мазке они располагаются хаотично, скоплениями или в виде гроздьев винограда.
Культуральные свойства. Бактерии растут на питательных средах, содержащих соль, желток куриного яйца, молоко, кровь. Обычно в микробиологических лабораториях используют элективные среды — ЖСА, МЖСА и кровяной агар. Колонии золотистого стафилококка имеют желтый или кремовый оттенок благодаря пигменту-каротиноиду и радужный венчик по периферии.
Биохимические свойства. Staphylococcus aureus сворачивает цитратную кроличью плазму, обладает лецитовителлазной активностью, расщепляет аэробный маннит.
Физиологические свойства. Бактерии устойчивы к замораживанию, нагреванию, солнечным лучам и некоторых химикатам. Оптимальная температура для жизнедеятельности стафилококка – 30-37°C. Способность к размножению микроб сохраняет при 4-43°C. Бактерии сохраняют жизнеспособность и в более суровых условиях. Отличительное свойство стафилококка ауреус – способность выживать в растворе поваренной соли. Микроб быстро приспосабливается к воздействию антибиотиков и антисептиков. В организме здорового человека размножение стафилококка ауреус сдерживается клетками иммунной системы, лакто- и бифидобактериями.
Патогенные свойства бактерии: адгезивность – прикрепление к клеткам макроорганизма, колонизация – размножение на этих клетках, инвазивность – проникновение внутрь клеток и продукция токсинов.

К факторам патогенности стафилококка ауреус относятся:

Фибринолизин способствует проникновению микробов в кровь и развитию сепсиса.
Гемолизины угнетают клеточный иммунитет и помогают стафилококкам выжить в очагах воспаления. Благодаря этим факторам инфекция может приобретать генерализированную форму.
Эксфолиатин повреждает клетки кожи. Он поражает эпидермис, вызывая появление таких пузырьков, как при ожогах.
Лейкоцитин разрушает лейкоциты — белые клетки крови.
Энтеротоксин – ядовитое вещество, вырабатываемое стафилококками и вызывающее у человека пищевое отравление. Он провоцирует рвоту, боль в животе, диарею. Этот яд накапливается в пище и не разрушается при термической обработке.
Коагулаза — фермент, свертывающий кровь. Плазмокоагулаза, продуцируемая Staphylococcus aureus, бывает двух видов: связанная с клеточной стенкой и свободная. Первая защищает микроб от фагоцитов, окружая барьером из свернувшейся крови, а вторая образует коагулазотромбин, вызывающий тромбообразование.
Белок А, выделенный с поверхности клеточной стенки стафилококка ауреус, хорошо связывает иммуноглобулины класса G.
Пенициллиназа защищает микроб от большинства пенициллиновых антибиотиков.
Лидаза расплавляет кожные покровы и потовые железы, позволяя бактериям проникнуть вглубь организма.
Эндотоксин, вырабатываемый микробом, приводит к развитию интоксикационного синдрома.

Устойчивость микробов к антибактериальным препаратам – проблема современной медицины. Отдельные штаммы Staphylococcus aureus приобретают резистентность к некоторым антибиотикам – цефалоспоринам и пенициллинам. Их называют метициллин-резистентными (MRSA). Антибиотикорезистентность обусловлена мутацией штаммов, произошедшей под давлением естественного отбора и наличием у стафилококка ауреус пенициллиназы — фермента, расщепляющего молекулу пенициллина. Метициллинрезистентные стафилококки очень важны в эпидемиологическом отношении.

Отличительные свойства актиномицетов

Кроме способности образовывать мицелий актиномицетов характеризуют следующие особенности:

Липофильная клеточная стенка, позволяющая хорошо переносить высушивание.
Возможность роста в воздушной среде.

Актиномицеты — бактерии с очень высокой продуцирующей способностью. Они способны производить огромное количество биологически активных соединений, включая антибиотики. По этой причине микробиология актиномицетов занимает особое место в биотехнологии. Большинство натуральных антибиотиков были выделены именно из этой группы микроорганизмов.

Способность к формированию тонких нитей не является уникальным признаком актиномицетов, поскольку некоторые представители других групп микроорганизмов обладают таким же строением. Например, род Hifomicrobium, относящийся к филуму протеобактерий.

Гранулоциты

Гранулоциты различаются по двум основным признакам структур клетки: наличие в толще цитоплазмы специфической зернистости (гранул) и сегментированного ядра. Каждый тип гранулоцитов содержит две разновидности гранул: специфические и неспецифические.

Под видом неспецифических гранул выступают особые формы лизосом – структур, которые содержат гидролитические ферментные вещества.

В зависимости от свойств специфических гранул в каждой клетке различают клетки базофилов, нейтрофилов и эозинофилов. Основное отличие нейтрофилов заключается в наименьшем размере гранул, составляющих всего 0,1-0,3 мкм. Состав этих гранул отличается содержанием фагоцитинов, лизоцима, а также щелочной фосфатазы. Основная функция нейтрофилов, как клеток человека, – защитная.

There is there are с исчисляемыми и неисчисляемыми существительными кратко
Макс фрай большая телега кратко содержание одной истории
Транспорт в берлине кратко
Первые буржуазные реформы в европе кратко
Соли в химии это кратко

Что это такое?

Тинкториальные свойства бактерий – это характеристики микроорганизмов, связанные с различной окраской и фиксацией красителей. Эти свойства позволяют изучать бактерии, их структуру, форму и функции.

Красители используются для того, чтобы показать различные структуры бактерий, такие как клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, ядерный материал и так далее. Кроме того, тинкториальные свойства позволяют идентифицировать микроорганизмы и определять их вид.

Для определенных красителей, таких как грам-краситель, существует специальный метод окрашивания, который разделяет бактерии на грамположительные и грамотрицательные. Этот метод используется для изучения бактерий и определения их устойчивости к антибиотикам.

Таким образом, тинкториальные свойства бактерий являются важным инструментом в микробиологии и помогают узнать более многое о структуре и функции этих микроорганизмов.

Морфологические свойства бактерий

Бактерии — микроорганизмы, не имеющие оформленного ядра (прокариоты).

Бактерии имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной дея-тельности.

Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная. Бактерии шаровидной формы — кокки — в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).

Палочковидные бактерии располагаются в виде одиночных клеток, дипло- или стрептобактерий. Извитые формы бактерий — вибрионы и спириллы, а также спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими спиральными завитками.

Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бактериальной клетки входят капсула, клеточная стенка, цитоплаз-матическая мембрана и цитоплазма, в которой содержатся нук-леоид, рибосомы и включения.

Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально или центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей веретенообразную форму. Методы окраски.

Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые за-ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение.

Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор — анион, то краситель имеет кислые свойства.

Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин.

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток.

Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе.

Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены. Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

Слайд 13 Методы окраски мазков Простой метод. Фиксированный мазок окрашивают каким-либо

синим (3—5 мин), промывают водой, высушивают и микроскопируют.Сложные методы. Включают

последовательное нанесение на препарат красителей, различающихся по химическомусоставу и цвету, протрав и дифференцирующих веществ. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.Окраска по методу Грама. 1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1—2 мин ее снимают, а краситель сливают..2. Наносят раствор Люголя на 1—2 мин.3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30—60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.4. Промывают препарат водой.5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1—2 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют.Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные — в красный (рис. 16).

Слайд 10 Приготовление препаратов для изучения микроорганизмов в живом состоянии. Метод

которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с

лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают объектив 40 и исследуют препарат.

1- предметное стекло с углублением в центре,2 – покровное стекло,3 – капля суспензии микроорганизмов.

Нарисуем невидимое, или Методы окраски микроорганизмов

Мы живем в мире бактерий. Они вокруг нас и внутри нашего организма. Не удивительно, что мы хотим знать о них как можно больше. Но как рассмотреть и тем более изучить что-то настолько маленькое? Микроскоп, казалось бы, должен решить эту проблему. Но не все так просто – в своем естественном состоянии микроорганизмы прозрачны как стекло. «Проявить» картинку помогают различные методы окраски бактерий, помогающие исследовать внешнее и внутреннее строение микробов.

Как все начиналось

В конце девятнадцатого века датский биолог Кристиан Грам предложил решение этой проблемы. Если что-то невидимо, его нужно покрасить и посмотреть, что получится. Метод окраски бактерий, предложенный Грамом, был настолько убедителен, что и по сей день микроорганизмы разделяют на грамположительные (удерживающие окраску) и грамотрицательные (обесцвечивающиеся после обработки спиртом).

Старый – не значит плохой

Пожалуй, самый практичный и широко применяемый способ окрашивания микроорганизмов – метод Грама. Мазок, зафиксированный огнем, покрывают метиловым фиолетовым красителем, фиксируют йодом, просушивают и промывают спиртом. На этом этапе, в зависимости от свойств клеточной мембраны, бактерии становятся:

ярко-синими (грамположительные);
бесцветными (грамотрицательные).

Витальные методы окраски

По состоянию исследуемых организмов в микробиологии существуют:

витальный способ, т. е. работа с живыми бактериями (опасен, требует строгого соблюдения техники безопасности);
поствитальный метод – работа с фиксированными (убитыми) клетками;
негативный, может быть витальным и поствитальным, удобен для работы с капсулами.

Работа с фиксированными препаратами

Белым по черному

Еще одна разновидность окраски бактерий основана на свойствах негатива, т. е. на темном фоне препарата четко видны бесцветные бактерии, иными словами, окрашивается среда, а не сам организм.

Иногда бактерии, попадая в определенные условия, образуют капсулы. Это слизистые образования, покрывающие клетку, чем-то похожие на гель. Капсулы прозрачны, их химический состав может сильно отличаться у разных видов бактерий, т.е. просто покрасить и оценить результат по получившемуся цвету не выйдет.

Окраска спорообразующих бактерий

Если говорить о клеточных оболочках, то нельзя не вспомнить о спорообразующих бактериях. Споры образуются при неблагоприятных для клетки условиях и могут существовать в агрессивной среде довольно длительное время. То, что хорошо для сохранения клетки, плохо для ее изучения. Споры очень плотные и почти не пропускают жидкости, кроме того, они кислотоустойчивы. Следовательно, простое окрашивание или метод Грама оставят споры бесцветными.

Как рассмотреть бактериальные жгутики

Еще одна непростая задача – окраска бактерий со жгутиками. Это спирально закрученные очень тонкие нити, которые микроорганизмы используют для перемещения. Жгутики необычайно тонкие, при окрашивании они легко отрываются от клетки. Поэтому перед началом окрашивания жгутики протравливают, искусственно увеличивая в объеме.

Техника окрашивания

Для получения окрашенного препарата нельзя просто взять кисточку, краски и отловить бактерию. Существует определенная схема работы с микроорганизмами:

Приготовление мазка. На предметное стекло (стерильное) наносят каплю воды, в которую затем бактериологической петлей вносят и распределяют по поверхности лабораторный материал.
Высушивание. Лишняя жидкость высушивается либо естественным путем при комнатной температуре, либо мазок немного прогревается высоко над пламенем горелки.
Фиксация. Мало просто убрать воду, нужно закрепить бактерии на предметном стекле. Для этого можно использовать огонь (несколько проходов над самой горячей частью пламени) или жидкость (спирт, ацетон). После такой обработки микроорганизмы быстрее впитывают краску.
Непосредственно окрашивание. Краска должна полностью покрывать всю поверхность мазка. Выдержав нужное время (для каждого красителя свое), краску убирают и промывают препарат водой.

ГЛАВА IV. МИКРОСКОПИЯ БАКТЕРИЙ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ

Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, при выявлении запасных веществ клетки. Определение формы и подвижности бактерий из свежевыделенной культуры проводится в препаратах «раздавленной» или «висячей» капли, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным.

МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ

I. Метод «раздавленной капли». Для приготовления препарата «раздавленной капли» необходимо использовать хорошо обезжиренные стекла, т. к. на поверхности пыльных и жирных стекол микробные клетки не фиксируются.

Материалы:

1) предметное стекло;

2) покровное стекло;

3) изотонический раствор хлорида натрия;

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. На середину обезжиренного предметного стекла бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой наносят бульонную культуру и равномерно распределяют на площади в 1 см2.

Для приготовления мазка из агаровой культуры на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора и в ней эмульгируют одну петлю микробов, взятой со среды.

2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом, и прижимают его к предметному так, чтобы не образовывались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.

3. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.

При работе с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.

Недостаток метода «раздавленной капли» — быстрое высыхание препарата, поэтому его надо микроскопировать сразу после приготовления.

II. Метод «висячей капли» при определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.

Материалы:

1) предметное стекло с лункой;

2) покровное стекло;

3) изотонический раствор хлорида натрия (NaCl);

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.

2. Накрывают перевернутым предметным стеклом с лункой, но с таким расчетом, чтобы капля оказалась в ее центре. Для сцепления стекол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

3. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.

Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные — проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.

III. Прижизненная окраска бактерий. Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии.

Материалы:

1) предметное стекло;

2) покровное стекло;

3) 0,001% раствора метиленового синего;

4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;

5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;

6) спиртовка.

Техника приготовления:

1. На середину предметного стекла наносят каплю 0,001% раствора метиленового синего, в которую следует внести взвесь бактерий.

2. После чего приготовить препарат «раздавленная капля» и микроскопировать его.

Какие бактерии имеют тинкториальные свойства?

Тинкториальные свойства — это способность бактерий быть окрашенными определенными красителями. Известны два основных типа красителей — основные и кислые. Некоторые бактерии имеют эти свойства, а некоторые нет. Различные методы окрашивания различных красителями позволяют идентифицировать и классифицировать бактерии.

Грам-положительные бактерии — это те, которые окрашиваются кристалловиолетовым и сохраняют цвет после обработки спиртом. Они имеют толстую стенку пептидогликана, который удерживает краситель внутри клетки. К этой группе относятся такие бактерии, как Стрептококки и Стафилококки.

Грам-отрицательные бактерии — это те, которые окрашиваются розовым красителем и теряют цвет после обработки спиртом. Их тонкая пептидогликановая стенка не удерживает краситель, поэтому он вымывается. К этой группе относятся такие бактерии, как E.coli и Salmonella.

Также есть несколько бактерий, которые не относятся ни к группе грам-положительных, ни к группе грам-отрицательных бактерий. Они могут иметь совершенно другие свойства окрашивания. К таким бактериям принадлежат Mycobacterium tuberculosis, которая оставляет после себя чувствительность к красному красителю, а также спорообразующие бактерии, которые имеют уникальные структуры, не характерные для других видов бактерий.

Самые распространенные красители

Чаще всего используются красители на основе анилина с разными значениями кислотных показателей (рН). Большинство красителей – порошки, которые разводят в спирте.

Красители, в которых красящими агентами являются катионы, называются основными (рН больше 7). С их помощью можно окрасить микроорганизмы в красный (фуксин, сафранин), фиолетовый (метилвиолет, тионин), синий (метиленовая синь), зеленый (малахитовая зелень), коричневый (хризоидин) и черный (индулин) цвета.

Красители, в которых красящими агентами являются анионы, называются кислотными (рН меньше 7). Они покрасят образец в красный (эозин), желтый (пикрин) или черный (нигрозин) цвета.

Есть группа нейтральных красителей (например, родамин В), где красящими агентами выступают и катионы, и анионы.

Гранулоциты

Бактерии и микроорганизмы